توضیحات
• افزایش صحت تکثیر تا 50 برابر نسبت به Taq DNA Polymerase.
• سرعت بالا با زمان Extension کوتاه (15-30 ثانیه بر کیلوباز).
• دارای دمین Sso7d برای افزایش پایداری اتصال DNA-آنزیم و بهبود بازدهی.
• مناسب برای تکثیر قطعات بزرگ (تا 7.5 کیلوباز).
• پایداری حرارتی بالا و مقاومت در دمای بالا.
• فعالیت 5´→3´ پلیمرازی و 3´→5´ اگزونوکلئازی.
• مناسب برای تکثیر قطعات با درصد GC بالا و ساختار ثانویه پیچیده.
• تولید محصول بیشتر با مقدار آنزیم کمتر.
• کاهش زمان آمادهسازی.
• فاقد آلودگی DNA باکتریایی
پروتکل آزمایشی
- آمادهسازی واکنش:
- مخلوط اصلی، پرایمرها و نمونه را روی یخ ذوب کنید.
- مخلوط واکنش را به شرح زیر آماده کنید:
جزء | حجم (میکرولیتر) | غلظت نهایی |
|---|
پرایمر F (X µM) | X | 0.5 µM |
پرایمر R (X µM) | X | 0.5 µM |
Master Mix (2X) | 10 | 1X |
DNA الگو | متغیر | 10–500 نانوگرم |
آب درجه PCR | متغیر | – |
حجم کل | 20 میکرولیتر | – |
- لولهها را 10 ثانیه سانتریفیوژ کنید.
- شرایط سیکلینگ PCR:
پروتکل سهمرحلهای:
دما (°C) | مدت زمان | تعداد سیکلها |
|---|
98 | 30 ثانیه | 1 |
98 | 5–10 ثانیه | 40-45 |
50-65 | 10–30 ثانیه | 40-45 |
72 | 15–30 ثانیه/کیلوباز | 40-45 |
پروتکل دومرحلهای:
دما (°C) | مدت زمان | تعداد سیکلها |
|---|
98 | 30 ثانیه | 1 |
98 | 5–10 ثانیه | 40-45 |
72 | 15–30 ثانیه/کیلوباز | 40-45 |
توجه: دمای اتصال معمولاً 3 درجه بالاتر از Tm پرایمر با Tm پایینتر انتخاب شود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.