1. تفاوت اصلی بین One Step RT-PCR و Two Step RT-PCR چیست؟

پاسخ: تفاوت اصلی در تعداد مراحل و لولههای مورد استفاده است. در One Step RT-PCR، هر دو مرحله رونویسی معکوس (تبدیل RNA به cDNA) و PCR (تکثیر cDNA) در یک لوله و یک برنامه حرارتی انجام میشوند. در حالی که در Two Step RT-PCR، این دو مرحله به صورت جداگانه در دو لوله یا با دو برنامه حرارتی مجزا انجام میشوند.

2. آیا One Step RT-PCR میتواند بار ویروسی (Quantification) را تعیین کند؟

پاسخ: بله، One Step RT-PCR میتواند به صورت کمیسازی (Quantitative One Step RT-PCR یا One Step RT-qPCR) نیز انجام شود. این روش برای تعیین بار ویروسی RNA (مانند در HIV، HCV، یا SARS-CoV-2) با استفاده از پروبهای فلورسانس (مانند TaqMan) یا رنگهای متصلشونده به DNA (مانند SYBR Green) بسیار رایج است.

3. چه ویروسهایی را میتوان با One Step RT-PCR تشخیص داد؟

پاسخ: One Step RT-PCR به طور خاص برای تشخیص ویروسهایی با ژنوم RNA طراحی شده است. از جمله ویروسهای رایج قابل تشخیص با این روش میتوان به SARS-CoV-2 (عامل COVID-19)، ویروس آنفلوآنزا (Influenza A/B)، HIV، ویروسهای هپاتیت C، ویروس نیل غربی، ویروس زیکا و بسیاری دیگر اشاره کرد.

4. آیا One Step RT-PCR از نظر حساسیت و دقت با Two Step RT-PCR قابل مقایسه است؟

پاسخ: در گذشته، برخی معتقد بودند که One Step RT-PCR ممکن است کمی حساسیت کمتری داشته باشد، اما با پیشرفت در فرمولاسیون آنزیمها و Master Mixها، کیتهای One Step RT-PCR مدرن از نظر حساسیت و دقت با کیتهای Two Step قابل رقابت هستند و در بسیاری از موارد حتی عملکرد بهتری را ارائه میدهند، به خصوص در کاهش آلودگی.

5. چرا استفاده از RNase Inhibitor در کیتهای One Step RT-PCR مهم است؟

پاسخ: در سیستمهای One Step RT-PCR، RNA الگو در یک لوله با آنزیم Reverse Transcriptase و سایر اجزا برای مدت طولانیتری در معرض محیط قرار میگیرد. وجود RNase Inhibitor در Master Mix حیاتی است زیرا از تخریب RNA الگو توسط آنزیمهای RNase (که ممکن است در نمونه یا معرفها وجود داشته باشند) جلوگیری میکند و پایداری RNA را در طول مرحله رونویسی معکوس تضمین مینماید، که برای سنتز cDNA کامل و دقیق ضروری است.

One Step RT-PCR: مزایا در تشخیص سریع بیماری‌ها

شرکت زیست ویرایش

خانه
محصولات
محصولات زیست‌ویرایش شامل مجموعه‌ای تخصصی از آنزیم‌ها، کیت‌های تشخیصی و ابزارهای پیشرفته در حوزه زیست‌فناوری و پزشکی مولکولی است که برای پژوهش، تشخیص و توسعه درمان‌های نوین طراحی شده‌اند. این محصولات با بالاترین استانداردهای علمی تولید شده و پاسخگوی نیاز آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، مراکز تشخیصی و شرکت‌های دارویی هستند.
درخواست محصول بالک
محصولات End Point PCR

Reverse Transcription and RT-PCR
Hot start PCR
Multiplex PCR
Standard PCR
High Fidelity & Long PCR
محصولات Ultrapure Enzymes

مهارکننده RNase
لوسیفراز | Luciferase
محصولات Real-time PCR

محصولات One Step qPCR
محصولات Probe Based qPCR
محصولات Dye-Based qPCR
محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

Protein Ladders
DNA Ladders
محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

DNA/RNA Extraction
PCR Extraction
Plasmid Extraction
محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

محصولات کیت تشخیص SARS-CoV-2 (مختص زمان کرونا)
کیت غربالگری / ژنوتایپینگ HPV
کاربرد
برای سهولت در انتخاب و افزایش دقت در فرآیندهای تحقیقاتی و تشخیصی، محصولات زیست‌ویرایش بر اساس کاربردهای تخصصی در حوزه زیست‌فناوری دسته‌بندی شده‌اند. این دسته‌ها شامل مواردی مانند NGS و توالی‌یابی، کلونینگ، SNP، ژنوتایپینگ، تشخیص پاتوژن و بیان ژن هستند. هر گروه، مجموعه‌ای از آنزیم‌ها و مستر میکس‌های بهینه را شامل می‌شود که متناسب با نیاز پژوهشگران و آزمایشگاه‌ها طراحی شده‌اند.
SNP

Taq DNA Polymerase Master Mix (2X), BLUE
Taq DNA Polymerase Master Mix (2X), RED
Cloning

Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
NGS and Sequencing

Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Gene Experession

cDNA Synthesis Kit
cDNA Synthesis Pre-Mixed Master Mix (2X)
cDNA Synthesis Pre-Mixed (2X) (Without Primers)
SYBR Green Master Mix, No ROX (2X)
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), Low ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), High ROX
Pathogen Detection

Luciferase
RNase Inhibitor, 20 U/µl
Dual Hot Start qPCR Master Mix (2X)
Hot Start qPCR Master Mix (2X)
One Step RT-qPCR Master Mix (2X)
Genotyping

SYBR Green qPCR Master Mix (2X), Low ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), High ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X)
Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
Dual Hot Start qPCR Master Mix (2X)
Hot Start qPCR Master Mix (2X)
درباره
تماس
مقالات

واتس اپ تماس با ما ایمیل

ویژگی	Two Step RT-PCR (دو مرحله‌ای)	One Step RT-PCR (یک مرحله‌ای)
مراحل	1. رونویسی معکوس (RT) 2. PCR (در لوله جداگانه یا با افزودن مجدد آنزیم و بافر)	1. رونویسی معکوس + PCR (در یک لوله)
لوله/ویال مورد نیاز	دو لوله برای هر نمونه (یک لوله برای RT و یک لوله برای PCR)	یک لوله برای هر نمونه
انتقال نمونه	نیاز به انتقال cDNA از لوله RT به لوله PCR	نیازی به انتقال نیست
برنامه حرارتی	دو برنامه مجزا در ترموسایکلر (یکی برای RT، یکی برای PCR)	یک برنامه حرارتی پیوسته در ترموسایکلر
افزودن معرف‌ها	دو بار (یک بار برای RT، یک بار برای PCR)	یک بار (Master Mix کامل)
صرف زمان Pipetting	بیشتر	کمتر
خطر آلودگی	بیشتر (به دلیل باز و بسته کردن مجدد لوله‌ها و انتقال)	کمتر (سیستم بسته)
توانایی بهینه‌سازی جداگانه	بالاتر (می‌توان RT و PCR را جدا بهینه کرد)	کمتر (بهینه‌سازی کلی)

- محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

- محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

- محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

One Step RT-PCR چیست؟ درک اصول و مکانیسم یکپارچه

مقایسه One Step RT-PCR با RT-PCR دو مرحله‌ای: یکپارچگی در برابر جدایی

مکانیسم عملکرد One Step RT-PCR: هم‌افزایی در یک لوله

محصول RNase Inhibitor زیست ویرایش

مزایای بی‌نظیر استفاده از One Step RT-PCR در تشخیص سریع بیماری‌ها

۱. افزایش چشمگیر سرعت و کارایی آزمایش

۲. کاهش قابل توجه خطر آلودگی و افزایش قابلیت اطمینان

۳. حساسیت و اختصاصیت بالا در تشخیص ویروس‌های RNA

۴. کاربردهای گسترده در تشخیص بالینی و تحقیقات

ملاحظات کلیدی برای بهینه‌سازی و عیب‌یابی One Step RT-PCR

۱. کیفیت RNA الگو: نقطه شروع موفقیت

۲. طراحی پرایمرها و شرایط واکنش

۳. انتخاب کیت مناسب: یکپارچگی و عملکرد

کیت One Step RT-PCR زیست ویرایش: ابزاری مطمئن برای تشخیص‌های سریع و دقیق

محصول One Step RT-PCR زیست ویرایش

مزایای برجسته کیت One Step RT-PCR زیست ویرایش

سوالات متداول

منابع