آیا میتوانم Master Mix را با پرایمرها و الگو از قبل مخلوط کنم و نگهداری کنم؟

به طور کلی توصیه نمیشود. پرایمرها و DNA الگو میتوانند به آنزیم متصل شوند و در طول زمان به آن آسیب بزنند یا باعث واکنشهای غیراختصاصی شوند. بهتر است Master Mix را از قبل آماده کنید و DNA الگو و پرایمرها را درست قبل از اجرای واکنش اضافه کنید.

آیا Master Mixها برای هر نوع PCR مناسب هستند؟

پاسخ: کاربرد اصلی آن در تعیین توالی نسل بعدی (NGS) مربوط به تکنیک تکثیر کل ژنوم با جابهجایی رشته (Whole Genome Amplification – WGA) است. این آنزیم میتواند مقادیر بسیار کم DNA (حتی از یک سلول) را به صورت یکنواخت و با دقت بالا تکثیر کند که برای آمادهسازی کتابخانههای NGS از نمونههای محدود یا آسیبدیده حیاتی است.

چگونه از یک Master Mix غلیظ استفاده کنم؟

Master Mixهای غلیظ (مثلاً 2x) باید با حجم مناسبی از آب RNase/DNase-free، پرایمرها و الگو رقیق شوند تا به غلظت نهایی (1x) برسند.

آیا میتوانم Master Mix را از قبل Aliquot کنم؟

بله، توصیه میشود. برای جلوگیری از چرخههای مکرر ذوب و انجماد، Master Mix را به بخشهای کوچکتر تقسیم کرده و در 20- یا 80- درجه سانتیگراد نگهداری کنید. این کار به حفظ پایداری آنزیم کمک میکند.

آموزش PCR با Master Mix - شرکت زیست ویرایش

شرکت زیست ویرایش

خانه
محصولات
محصولات زیست‌ویرایش شامل مجموعه‌ای تخصصی از آنزیم‌ها، کیت‌های تشخیصی و ابزارهای پیشرفته در حوزه زیست‌فناوری و پزشکی مولکولی است که برای پژوهش، تشخیص و توسعه درمان‌های نوین طراحی شده‌اند. این محصولات با بالاترین استانداردهای علمی تولید شده و پاسخگوی نیاز آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، مراکز تشخیصی و شرکت‌های دارویی هستند.
درخواست محصول بالک
محصولات End Point PCR

Reverse Transcription and RT-PCR
Hot start PCR
Multiplex PCR
Standard PCR
High Fidelity & Long PCR
محصولات Ultrapure Enzymes

مهارکننده RNase
لوسیفراز | Luciferase
محصولات Real-time PCR

محصولات One Step qPCR
محصولات Probe Based qPCR
محصولات Dye-Based qPCR
محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

Protein Ladders
DNA Ladders
محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

DNA/RNA Extraction
PCR Extraction
Plasmid Extraction
محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

محصولات کیت تشخیص SARS-CoV-2 (مختص زمان کرونا)
کیت غربالگری / ژنوتایپینگ HPV
کاربرد
برای سهولت در انتخاب و افزایش دقت در فرآیندهای تحقیقاتی و تشخیصی، محصولات زیست‌ویرایش بر اساس کاربردهای تخصصی در حوزه زیست‌فناوری دسته‌بندی شده‌اند. این دسته‌ها شامل مواردی مانند NGS و توالی‌یابی، کلونینگ، SNP، ژنوتایپینگ، تشخیص پاتوژن و بیان ژن هستند. هر گروه، مجموعه‌ای از آنزیم‌ها و مستر میکس‌های بهینه را شامل می‌شود که متناسب با نیاز پژوهشگران و آزمایشگاه‌ها طراحی شده‌اند.
SNP

Taq DNA Polymerase Master Mix (2X), BLUE
Taq DNA Polymerase Master Mix (2X), RED
Cloning

Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
NGS and Sequencing

Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Gene Experession

cDNA Synthesis Kit
cDNA Synthesis Pre-Mixed Master Mix (2X)
cDNA Synthesis Pre-Mixed (2X) (Without Primers)
SYBR Green Master Mix, No ROX (2X)
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), Low ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), High ROX
Pathogen Detection

Luciferase
RNase Inhibitor, 20 U/µl
Dual Hot Start qPCR Master Mix (2X)
Hot Start qPCR Master Mix (2X)
One Step RT-qPCR Master Mix (2X)
Genotyping

SYBR Green qPCR Master Mix (2X), Low ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X), High ROX
SYBR Green qPCR Master Mix (2X)
Z-Phusion High-Fidelity Enzyme and Reaction Buffer
Z-Phusion High-Fidelity Master Mix (2X)
Dual Hot Start qPCR Master Mix (2X)
Hot Start qPCR Master Mix (2X)
درباره
تماس
مقالات

واتس اپ تماس با ما ایمیل

- محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

- محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

- محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

محصولات Electrophoresis Ladders (به‌زودی)

محصولات Extraction Kits (به‌زودی)

محصولات IVD Diagnostics Kits (به‌زودی)

راهنمای گام‌به‌گام انجام PCR با استفاده از Master Mix: از آماده‌سازی تا نتایج مطلوب

آماده‌سازی‌های اولیه: پیش از شروع کار

۱. برنامه‌ریزی و طراحی PCR:

۲. آماده‌سازی محیط و تجهیزات:

مرحله اول: محاسبه و آماده‌سازی مخلوط اصلی (Master Mix)

1. محاسبه حجم‌ها:

فرمول محاسبه حجم هر جزء:

2. آماده‌سازی Master Mix اصلی:

مرحله دوم: آماده‌سازی لوله‌های واکنش و اجرای PCR

1. توزیع Master Mix و افزودن الگو:

2. اجرای واکنش در ترموسایکلر:

مرحله سوم: تحلیل نتایج با الکتروفورز ژل

1. آماده‌سازی ژل:

2. اجرای الکتروفورز:

3. مشاهده و تحلیل نتایج:

چرا Master Mix زیست ویرایش انتخاب برتر است؟

نتیجه‌گیری

سوالات متداول

منابع